尼达尼布对 T 细胞活化、亚群和功能的影响

背景：T 细胞是炎症的重要调节剂，通过释放介质，可导致肺纤维化。尼达尼布被批准用于治疗特发性肺纤维化、系统性硬化相关的间质性肺病 (ILD) 和具有进行性表型的慢性纤维化 ILD。然而，尼达尼布如何靶向 T 细胞尚未阐明。

材料和方法：我们研究了尼达尼布对从健康供体中分离的 T 细胞和外周血单核细胞的免疫调节作用。细胞用不同浓度的尼达尼布预孵育，然后用抗 CD3 刺激 24 小时，有或没有抗 CD28，有或没有不同的细胞因子。对干扰素 γ (IFN-γ)、白介素 (IL)-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12p70 和 IL-13 的水平进行定量。使用针对磷酸-Lck-Y394、磷酸-Lck-Y505、Lck-total 和 Cofilin 的一抗进行的蛋白质印迹检测 Lck 蛋白的磷酸化水平。还评估了体外 T 细胞增殖、T 细胞聚集和不同的 T 细胞群。

结果：尼达尼布通过抑制 Lck-Y394 磷酸化来阻断 T 细胞活化。用尼达尼布预处理 T 细胞可减少作为激活标志物的簇形成，并抑制临床相关浓度的 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12p70 和 IL-13 的释放范围为 5–77 nmol/L。尼达尼布不会改变 T 细胞增殖或 CD4+ 和 CD8+ T 细胞的数量，但会增加刺激的 Th17 样细胞而不增加 IL-17A 水平。

结论：这些免疫调节作用可以进一步解释尼达尼布如何减缓各种 ILD 中肺纤维化的进展。

关键词：细胞因子，纤维化，炎症，尼达尼布，T细胞，酪氨酸激酶

介绍

T 细胞是免疫系统的重要调节剂，是控制炎症的核心。它们广泛存在于整个肺中，并且已知与纤维化间质性肺病 (ILD) 中的肺纤维化有关，例如特发性肺纤维化 (IPF)，以及肺动脉高压 (PAH)。1T 细胞也在异位淋巴组织中被鉴定，导致 IPF 和 PAH 患者的持续炎症。肺纤维化还可以在多种结缔组织疾病中表现出来，包括系统性硬化症(SSc/硬皮病)、类风湿性关节炎 (RA)，以及慢性过敏性肺炎 (cHP) 患者。

先天性和适应性免疫系统都参与了纤维化的发展。因此，循环外周血单核细胞 (PBMC)，包括 T 细胞，似乎在 SSc、RA 和 cHP 的发病机制中起重要作用。纤维化的特点是成纤维细胞的扩张和细胞外基质 (ECM) 的过度沉积，通过来自各种细胞因子、趋化因子和其他介质的信号传导。由于 T 细胞浸润，肺纤维化通常先于炎症，这表明这些细胞对纤维化的病理学很重要。T 细胞是刺激和转化成纤维细胞的介质的主要来源，导致 ECM 过度沉积，这可能导致 SSc-ILD、RA-ILD 和 cHP 患者的肺纤维化，但也可能下调纤维化反应(见 Zhang 等人综述)。

大量不同的 T 细胞亚群参与了纤维化反应，例如 T 辅助细胞(Th;包括 Th1、Th2、Th9、Th17、Th22)和 T 滤泡辅助细胞、调节性 T(Treg)细胞、天然杀伤 T 细胞、γδ T 细胞、CD8+ 细胞毒性 T 淋巴细胞和 T 滤泡调节细胞(在 Heukels 等人和 Zhang 等人综述)。

根据它们的激活状态、互连性和疾病病理，几乎所有 T 细胞亚群都能够释放多种介质，如白细胞介素 (IL)-2、IL-4、IL-9、IL-13、IL-17、IL- 22 和干扰素 γ (IFN-γ)，以调节纤维化反应。

尼达尼布是一种口服、强效、小分子酪氨酸激酶抑制剂，靶向成纤维细胞生长因子受体 1-3、血小板衍生生长因子受体 α 和 β、血管内皮生长因子受体 1-3 和多种非受体酪氨酸激酶，包括原癌基因酪氨酸蛋白激酶 (Src)、Lyn、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶 (Lck)、Fms 样酪氨酸激酶-3、集落刺激因子-1 受体和其他几种酪氨酸激酶。通过与这些酪氨酸激酶的细胞内三磷酸腺苷结合位点结合，尼达尼布抑制细胞内信号转导通路的激活。

临床前研究表明，尼达尼布在肺纤维化模型中发挥抗纤维化和抗炎活性，而临床试验在 IPF、SSc-ILD 19和最近的一系列纤维化ILD患者中显示出良好的疗效和安全性一种渐进的表型，尼达尼布抑制 IPF 患者的成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化和肺成纤维细胞的增殖。它还证明了肺纤维化的不同动物模型中纤维化和炎症的减少。

然而，尚未探索尼达尼布通过 T 细胞靶向肺纤维化的潜在机制。我们知道，T细胞活化依赖于T细胞抗原受体(TCR)信号，这是通过几个酪氨酸激酶，如Src和LCK，磷酸化启动和通过的Fyn的磷酸化抑制。磷酸化导致下游信号通路的激活，最终激活负责 T 细胞增殖、分化或凋亡的转录因子。特别是，Lck 在 T 细胞刺激后被激活，是 T 细胞增殖和介质释放(如 IL-2)所必需的。抑制 Lck 可诱导抗糖皮质激素 T 急性淋巴细胞白血病细胞凋亡。本研究的目的是探索尼达尼布对 T 细胞活化、亚群和功能的免疫调节作用。